液相色譜的色譜泵吸濾頭，進(jìn)出口閥及管路（包括進(jìn)樣器和檢測(cè)池）若被污染，應(yīng)做清洗和鈍化處理，先清洗再鈍化。
清洗的目的是去除不銹鋼管路及系統(tǒng)內(nèi)的污垢，清洗必須在鈍化之前完成。鈍化的目的是使不銹鋼管路的內(nèi)表面形成光滑均勻的氧化膜。
HPLC系統(tǒng)內(nèi)部污染物可能來(lái)自實(shí)驗(yàn)人員觸摸、暴露于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、儀器零部件上的殘留物，或來(lái)自流動(dòng)相和樣品的殘留。雖然系統(tǒng)自身可以通過(guò)流動(dòng)相清洗，但某些釋放出的雜質(zhì)會(huì)吸附液相系統(tǒng)，從而降低總的性能。
那么怎么對(duì)高效液相色譜進(jìn)行保養(yǎng)呢？一起來(lái)看看吧。
01 液相色譜的酸清洗
通常使用30%磷酸水溶液清洗，具體操作：
1）取下色譜柱，改用兩通連接。
2）用超純水灌注泵頭。
3）用30%磷酸水溶液以1mL/min的流速?zèng)_洗1h（UPLC降低流速增加沖洗時(shí)間）。
4）換成超純水沖洗至出水口水pH顯中性。
5）用純甲醇過(guò)渡，浸潤(rùn)泵頭及管路，備用。
02 液相色譜的鈍化
1. 鈍化的目的
防止腐蝕：鈍化層可以阻止金屬與腐蝕介質(zhì)接觸，減少金屬腐蝕速度。
增加耐久性：鈍化層可以提高金屬的耐久性和抗磨損性能，延長(zhǎng)其使用壽命。
改善峰形：金屬離子和待測(cè)物形成相互作用，會(huì)造成色譜峰消失或峰展寬。特別是對(duì)含有磷酸基團(tuán)或羧酸基團(tuán)的物質(zhì)具有明顯的峰形改善。鈍化主要為了解決物質(zhì)的拖尾問(wèn)題。這些物質(zhì)主要是極性陰離子的分析物，如含磷酸官能團(tuán)的分析物，有機(jī)酸分析物，糖苷類(lèi)物質(zhì)和生物大分子（包含多肽，蛋白、核苷等）。
2. 鈍化具體操作
1）取下色譜柱，改用兩通連接，用純水灌注泵頭。
2）用6M硝酸水溶液以1mL/min的流速鈍化1h（UPLC降低流速增加鈍化時(shí)長(zhǎng)）。
3）換成清水洗至出口水pH顯中性。
4）用純甲醇過(guò)渡，浸潤(rùn)泵頭及管路，備用。
3. 如果鈍化解決不了，那就解決殘存的金屬離子。解決思路有兩個(gè)，一個(gè)是競(jìng)爭(zhēng)金屬離子，一個(gè)是消滅金屬離子。
競(jìng)爭(zhēng)金屬離子的策略有：在流動(dòng)相中加入EDTA或檸檬酸或亞甲基二磷酸，也可使用基質(zhì)樣品飽和管路，使用高濃度待測(cè)物飽和管路，酸化樣品等都是可供嘗試的策略。
注意在質(zhì)譜系統(tǒng)中EDTA可能造成離子抑制，造成分析物的信號(hào)降低，亦可能在噴針尖端析出。
消滅金屬離子最簡(jiǎn)單的就是替換掉金屬管路：比如使用生物惰性儀器組件和色譜柱硬件（如月旭金剛石柱管色譜柱）等。
整體來(lái)看，使用生物兼容管路是防止蛋白類(lèi)物質(zhì)在儀器組件和色譜柱上吸附的最佳選擇。如果不能在硬件上實(shí)現(xiàn)替換，一個(gè)可行的思路是使用Peak管路替換現(xiàn)有的金屬流路，但需要注意系統(tǒng)耐壓等。
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