（圖片來(lái)源baotu）
頂尖藥苑，韻味無(wú)窮，中藥的魅力，神秘而燦爛。中藥文化是中華民族優(yōu)秀傳統(tǒng)文化，是中華民族幾千年來(lái)形成的對(duì)生命的認(rèn)知、健康維護(hù)以及疾病防治的思想和方法體系。
目前國(guó)家大力推廣中藥，但是中藥飲片以及中藥制劑成百上千，相當(dāng)多的中藥品種只規(guī)定了性狀、顯微鑒別等檢查項(xiàng)，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)，質(zhì)量控制水平較低，產(chǎn)品臨床療效無(wú)法得到保障，限制了該產(chǎn)品的臨床推廣。因此制定準(zhǔn)確的中藥HPLC定量測(cè)定方法尤為重要，為提升中藥品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可靠依據(jù)。
中成藥由于藥材品種組成復(fù)雜，一般來(lái)說(shuō)需要根據(jù)藥材組成確定各藥材的主要有效成分（可參照中國(guó)藥典中各中藥飲片的有效成分），然后針對(duì)各有效成分開(kāi)發(fā)單獨(dú)或同時(shí)的含量測(cè)定方法。下面我們就以藏藥驗(yàn)方“三味檀香湯散”為例，介紹下這款中成藥的含量測(cè)定方法開(kāi)發(fā)過(guò)程。
三味檀香湯散
三味檀香湯散，記載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·藏藥: 第一冊(cè)》和《四部醫(yī)典》，由廣棗、肉豆蔻、檀香3味中藥材粉碎成細(xì)粉后直接入藥制備，是藏醫(yī)治療心熱病的常用驗(yàn)方，處方簡(jiǎn)單且臨床療效好。
但是三味檀香湯散在《部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)》中只規(guī)定了性狀、顯微鑒別以及參照 2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》通則的散劑檢查，缺少含量測(cè)定項(xiàng)。安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院最新在《藥物分析雜志》發(fā)表的《HPLC法同時(shí)測(cè)定藏藥三味檀香湯散中主要指標(biāo)成分的含量》有效解決了這個(gè)問(wèn)題。
主要指標(biāo)成分的選擇
本方法根據(jù)《中國(guó)藥典》中廣棗、肉豆蔻藥材規(guī)定的含量測(cè)定項(xiàng)，選擇沒(méi)食子酸和去氫二異丁香酚2種成分作為三味檀香湯散的主要指標(biāo)成分。
含量測(cè)定條件選擇
本研究采用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描 （190～700nm），結(jié)果顯示沒(méi)食子酸在270nm處有最大吸收，去氫二異丁香酚在274nm處有最大吸收，在270nm處也有較大吸收，最終選擇 270nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。
本品的指標(biāo)成分沒(méi)食子酸的化學(xué)名稱(chēng)為3，4，5 －三羥基苯甲酸，多羥基成分極性較大，而去氫二異丁香酚的化學(xué)名稱(chēng)為4－（2，3－二氫－7－甲氧基－3－甲基－5－丙烯基－2－苯并呋喃基）－2－甲氧基苯酚，極性顯著弱于沒(méi)食子酸，根據(jù) 2020年版《中國(guó)藥典》含量測(cè)定法，沒(méi)食子酸和去氫二異丁香酚的液相測(cè)定需要采用不同的流動(dòng)相，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)40min。
2個(gè)主要指標(biāo)成分若單獨(dú)分析，則需要配制不同極性的流動(dòng)相，會(huì)增加進(jìn)樣次數(shù)、分析時(shí)間和實(shí)驗(yàn)成本，故本實(shí)驗(yàn)采用梯度洗脫的方式。同時(shí)對(duì)2個(gè)成分進(jìn)行定量測(cè)定。對(duì)于檢測(cè)時(shí)間的優(yōu)化，本研究嘗試縮短檢測(cè)時(shí)間，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加快流動(dòng)相的梯度洗脫速度會(huì)導(dǎo)致基線(xiàn)漂移嚴(yán)重。
同時(shí)也比較了磷酸－甲醇溶液和醋酸－甲醇溶液分別作為流動(dòng)相的色譜峰分離度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)前者所得樣品峰分離度顯著優(yōu)于后者，故最終選擇磷酸－甲醇溶液作為流動(dòng)相，分析時(shí)間為60min。后期將進(jìn)一步通過(guò)調(diào)整流動(dòng)相的組成等手段，繼續(xù)優(yōu)化梯度洗脫方法。
這篇論文選擇了月旭Ultimate? XB-C18液相色譜柱，通過(guò)建立完善的方法學(xué)考察過(guò)程，考察了系統(tǒng)適用性，專(zhuān)屬性試驗(yàn)，線(xiàn)性關(guān)系，檢測(cè)限，定量限考察，精密度試驗(yàn)，重復(fù)性試驗(yàn)，穩(wěn)定性試驗(yàn)和加樣回收試驗(yàn)。
例：系統(tǒng)適用性及專(zhuān)屬性試驗(yàn)
1.沒(méi)食子酸 2.去氫二異丁香酚
混合對(duì)照品（A）、供試品（B）、
缺廣棗陰性樣品（C）、缺肉豆蔻陰性樣品（D）
及空白（E）的HPLC圖
結(jié)論：
本研究建立了HPLC法同時(shí)測(cè)定三味檀香湯散中的指標(biāo)成分沒(méi)食子酸和去氫二異丁香酚，同時(shí)進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果表明本方法科學(xué)、可行。同時(shí)，本方法的線(xiàn)性范圍廣，系統(tǒng)適用性、重復(fù)性、精確性良好，樣品處理的方法穩(wěn)定可行，可用于三味檀香湯散的質(zhì)量評(píng)價(jià)，為本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供參考。
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